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病毒RNA m6A甲基化定量检测、酶活性分析、抗体研究

发布者:艾美捷科技发布时间:2021-02-04

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      上周我们向大家介绍了病毒RNA用于m6A甲基化研究的样本的提取和纯化方法,这周将为大家带来m6A甲基化研究相关的产品。

 

      病毒RNA m6A甲基化研究流程

 

      上周给大家说了病毒RNA的提取和纯化,如果大家的样本是细胞或者组织,就参考流程图的右边部分。关于组织和细胞的m6A甲基化研究大家应该都很清楚,那么病毒RNA m6A研究有什么不同呢?

 

病毒RNA m6A甲基化研究流程

 

      上面这个流程算是总结版本的。一般我们研究m6A逃不过三大方面:m6A RNA的定量; m6A 甲基转移酶和去甲基化酶活性分析;m6A RNA富集、RNA特异性甲基化分析和文库建立。

 

      1.病毒RNA m6A定量检测:

       RNA甲基化是一种可逆的翻译后修饰,对大量的生物过程产生表观遗传学影响,这些都可以发生在病毒和非病毒衍生的RNA中。其中最常见的是m6A甲基化,占所有RNA甲基化的80%以上,其次是5-mC甲基化,它可以发生在各种RNA分子中。如果您的研究打算研究RNA中m6A或5-mC的全球甲基化水平,我们推荐的比色法和荧光法试剂盒可以帮助提供快速、准确的总体水平定量。然而,也必须知道,如果使用病毒起始材料,这个过程会略有变化。如果是这种情况,您需要确保可以提高所产生的总RNA的产量,因为从病毒起始材料收集的低量往往太低,无法用于下游。 我们建议参考我们最近的公告文章的各种方法的病毒纯化的想法(有需要的小伙伴可联系小艾哟),如何确保总RNA的质量,在您的实验流程的后期使用。

 

货号 产品名称 产品描述
cat# P-9005 EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Colorimetric) 在3h 45min内对RNA中的N6-甲基腺苷(m6A或6mA)进行比色定量。
cat# P-9008 EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Fluorometric) 在3h 45min分钟内荧光定量RNA中的N6-甲基腺苷(m6A或6mA)
cat# P-9015 MethylFlash Urine N6-methyladenosine (m6A) Quantification Kit (Colorimetric) 使用抑制性竞争性ELISA在4小时内对尿液中的m6A进行比色定量。


     2.m6A 甲基转移酶和去甲基化酶活性分析

      如果您计划研究RNA甲基化酶或去甲基化酶的活性/抑制,我们建议使用我们强大的核提取试剂盒,它速度快,确保分离后酶活性保持不变。一旦收集到核提取液,就可以进入有助于测量甲基化酶或去甲基化酶活性/抑制的检测。我们的比色ELISA试剂盒允许对提取的核样品进行高通量或手动通量分析,并进行了优化,以确保背景信号保持在较低水平,因此测量是准确和可靠的。

 

货号 产品名称 产品描述
cat# P-9013 Epigenase m6A Demethylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric) 基于ELISA的5小时内FTO、ALKBH5等活性/抑制的定量分析。
cat# P-9019 Epigenase m6A Methylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric) 基于酶联免疫吸附法的METTL3、METTL14等在5小时内对多种物种的活性/抑制性进行定量。

 

      3.m6A RNA富集和文库建立

      一旦工作流程中的其他步骤完成,一项研究可能最终会寻求富集基因组中存在m6A的部分,并通过构建文库为下一代测序准备这些片段。我们下面列出的检测试剂盒都允许富集m6A RNA,而EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒为同时构建文库提供了额外的功能。

 

货号 产品名称 产品描述
cat# P-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit 基于CUT&RUN的MeRIP,增加特异性和信号。
cat# P-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit 基于CUT&RUN的一体化MeRIP和NGS文库制备。

 

      4.m6A RNA抗体

      如前所述,m6A是最丰富的mRNA修饰,因此,通常是研究表观遗传RNA修饰的研究人员感兴趣的主题。此类研究通常包含单克隆抗体和多克隆抗体,以验证结果并帮助了解一旦宿主感染后这种特定修饰如何影响病毒的发展和疾病的影响。 我们的抗体已在所有列出的应用中得到验证,并为希望在大批量购买之前尝试尝试想法的实验室提供试验规模。

 

货号 产品名称 产品描述
cat# A-1801 N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody 经过验证的应用。DB、ELISA、ICC、IP、MeRIP、核苷酸阵列。
cat#A-1802 N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody [2H6]

经过验证的应用。DB, ELISA, IF, IP, MeRIP, 核苷酸阵列。

 

      看到上面这两种抗体的应用很多,基本涵盖我们实验可能应用到的实验类型,但是呢有个非常常见的应用却没有,没错,就是WB。很多小伙伴问我们的这个抗体可以做WB不?每次都很遗憾的说不可以。但是,现在我们有了可以做WB的m6A抗体!!!为了弥补小伙伴们的遗憾,我们最近签约代理了一个新的品牌——Synaptic Systems(SySy),SySy是德国著名的品牌,专注于研发和生产针对突触和神经科学相关抗体,以及用于细胞生物学、组织病理学和高分辨率显微镜的各种抗体,他们的抗体被诸多高分文章引用,产品独特且专业。他们的家的m6A抗体信息如下:

 

货号 产品名称 产品应用/适用物种 品牌
cat# 202-003 m6A - 202 003 WB / IP / ICC / IHC-P / ELISA
人 / 大鼠 / 小鼠 / 真核生物 / 原核生物
Synaptic Systems
cat#202-011 m6A - 202 011 WB
人 / 大鼠 / 小鼠 / 真核生物 / 原核生物
Synaptic Systems
cat# 202-111 m6A - 202 111 WB / IP / ELISA
人 / 大鼠 / 小鼠 / 真核生物 / 原核生物
Synaptic Systems
这三个产品的参考文献也非常多哟,各位小伙伴想要了解的可咨询小艾哟!

 

      最后的最后,总结一下病毒RNA m6A研究流程与普通的组织和细胞样本的区别:其实没啥区别,用的试剂盒基本都一样,方法也是一样的,但是区别在哪呢?就是病毒RNA的量和纯度问题,这个会影响整个实验流程,所以为了更好地完成实验课题,各位小伙伴要制备好的病毒RNA样本哦!

 

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